細(xì)胞名稱：LN382人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)）

培養(yǎng)條件：

RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巰基乙醇＋1% 雙抗

到貨處理

用75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

1.不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入 37℃培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2.通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞，然后將細(xì)胞沉淀加入5-8ml的培養(yǎng)基輕輕吹打均勻后移入新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

培養(yǎng)時(shí)的注意技巧

1.換液前將培養(yǎng)瓶豎在培養(yǎng)箱靜置1小時(shí)左右，輕輕吸掉3ml左右培養(yǎng)基，然后加入3ml的新鮮培養(yǎng)基，混勻后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.如果細(xì)胞密度比較稀，培養(yǎng)基沒有明顯變化，可以加入500ul的FBS混勻后，豎著培養(yǎng)。

3.傳代時(shí)，先按照換液步驟處理，吸掉3ml左右培養(yǎng)基后，加入10ml的新鮮培養(yǎng)基，混勻后分2個(gè)T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

4.培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細(xì)胞。

5.該細(xì)胞比較脆弱，培養(yǎng)過(guò)程中不要頻繁拿出來(lái)觀察，以免影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。

6.該細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境比較敏感，需使用較好的血清培養(yǎng)。

7.建議使用未TC處理的瓶或者皿培養(yǎng)。

訂購(gòu)建議：

為避免收到細(xì)胞后離心處理，推薦使用15ml離心管發(fā)貨，

到貨后直接分裝到2個(gè)T25培養(yǎng)瓶即可。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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