細胞名稱：SUP-T1人T淋巴母細胞瘤細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS1345P兔乳腺上皮原代細胞

YS1346P兔血管外膜成纖維原代細胞

YS1347P兔脂肪干原代細胞

YS1348P兔脂肪間充質干原代細胞

YS1349P兔主動脈內皮原代細胞

YS1350P兔主動脈平滑肌原代細胞

YS1351P兔椎間盤髓核原代細胞

YS1352P兔椎間盤纖維環(huán)原代細胞

YS1353P兔子宮成纖維原代細胞

YS1354P兔子宮內膜上皮原代細胞

YS1355P兔子宮平滑肌原代細胞

YS1356P兔臍靜脈內皮原代細胞

YS1357P兔外周血巨噬原代細胞

YS1358P人腦微血管內皮原代細胞

YS1359P人腦血管平滑肌原代細胞

YS1360P人腦血管外膜成纖維原代細胞

YS1361P人腦血管周原代細胞

YS1362P人脈絡叢內皮原代細胞

YS1363P人脈絡叢上皮原代細胞

YS1364P人脈絡叢成纖維原代細胞

YS1365P人腦膜原代細胞

YS1366P人軟腦膜周原代細胞

YS1367P人神經元原代細胞

YS1368P人小腦顆粒原代細胞

YS1369P人海馬趾神經元原代細胞

YS1370P人大腦皮層神經元原代細胞

YS1371P人腦干神經元原代細胞

YS1372P人少突膠質前體原代細胞

YS1373P人少突膠質前體原代細胞--球形

YS1374PHiPSC人源性神經干原代細胞

YS1375P人雪旺原代細胞

YS1376P人神經束膜原代細胞

YS1377P人星形膠質原代細胞

YS1378P人小腦星形膠質原代細胞

YS1379P人脊髓星形膠質原代細胞

YS1380P人海馬星形膠質原代細胞

YS1381P人星形膠質原代細胞--腦干

YS1382P人星形膠質原代細胞-中腦

YS1383P人視網膜星形膠質原代細胞

更多細胞歡迎咨詢我們：SUP-T1人T淋巴母細胞瘤細胞ATCC