9N 2.0 DNA連接酶試劑（又名9oN DNA Ligase）能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5′-磷酸末端和3′-羥基末端通過磷酸二酯鍵相連。該酶來源于極度耐熱的海底超嗜熱古菌（Thermococcus sp.）9°N 菌株中克隆的連接酶基因，在 45℃-70℃ 范圍內(nèi)均有活性。該酶進(jìn)一步經(jīng)基因工程基因突變，使得耐受更高的溫度，在95℃孵育5min后活性幾乎無損失，因此其適用于：

（1）高溫條件下，連接DNA鏈上的切刻位點

（2）適用LCR反應(yīng)（Ligase Chain Reaction）

（3）適用MLPA反應(yīng)（Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification）

活性定義

1單位指 20μl反應(yīng)體系中，50℃條件下，15分鐘內(nèi)能使50%的1pmol的接頭片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存兩年。

9N 2.0 DNA連接酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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